Производство соматропина

Новизна предлагаемой схемы получения рекомбинантного человеческого гормона роста заключается в использовании специального тага – SUMO подобного белка пекарских дрожжей, кодируемого геном SMT3 – и специализированной протеазы (кодируемой С доменом белка Ulp1 из S. cerevisiae), которая специфически узнает и отрезает Smt3. Использование SUMO-подобных тагов дает существенные преимущества, так как позволяет увеличить экспрессию целевого белка, повысить его растворимость и облегчить правильную укладку. Еще одно важное преимущество заключается в том, что отрезание Smt3 тага не зависит от последовательности целевого белка, так как Ulp1 протеаза узнает структуру SUMO-подобного тага, что позволяет получить целевой белок без дополнительных аминокислот. Это существенное преимущество, так как при экспрессии рекомбинантного белка в E.coli, этот белок обязательно должен содержать аминокислоту метионин на N – конце белка, для гормона роста такая «добавка» существенно снижает его активность. Преимущество использования этого тага усиливаются, если к нему пришить последовательность из 6 гистидинов, которая позволяет афинно задерживать белки на Ni содержащих хроматографических сорбентах. Таким образом существенная часть очистки рекомбинантного белка проходит в три стадии: на первой – белок очищается метал-хелатной хроматографией на Ni содержащей колонке, на второй – от целевого белка отрезается таг, на третьей – целевой белок проходит в «проскоке» через ту же Ni содержащую колонку, а «недорезанный» белок, SUMO-таг и протеаза задерживаются на колонке, так как содержат последовательность из 6 гистидинов.