Cоматотропин
Реагент представляет собой человеческий соматотропин — рекомбинантный белок с молекулярным весом 22 кДа получаемый генно-инженерным способом с использованием культуры Е. Coli BL31. Представляет собой замороженный раствор с концентрацией целевого белка 3,5 мг/мл.
В качестве продуцента соматотропина применяют штамм E.coli, содержащий многокопийную плазмиду широкого круга хозяев типа рТ, с клонированным в ней геном человеческого соматотропина. Морфологические, культуральные и физико-биохимические свойства штамма- продуцента должны быть стабильными в течение года хранения в лиофилизированном виде при температуре минус (19 ± 1) °С.
Методы контроля:
Общие требования к испытаниям реагента — в соответствии с требованиями ГОСТ 27025, ТУ 9358-001-34341095-2014 и в соответствии с методиками испытаний, утвержденными в установленном порядке.
Проверку качества реагента проводят по следующим показателям: внешний вид, прозрачность, подлинность, механические примеси, показатель концентрации водородных ионов, белок, стерильность, пирогенность, токсичность, специфическая активность, удельная активность, примеси белков штамма- продуцента, примеси нуклеиновых кислот, чистота реагента и его гомогенность, молекулярная масса.
Подлинность — методом ВЭЖХ — Высокоэффективная жидкостная хроматография. Время удерживания основного пика в растворах и стандартного образца должны совпадать.
Показатель концентрации водородных ионов (pH) определяют потенциометрически.
Определение белка — по методу Лоури. Перед определением реагент разбавляют водой в два раза.
Стерильность (бактериальная обсемененность) — показатель, указывающий на полное отсутствие патогенной и непатогенной микрофлоры, проверяют методом посева или мембранной фильтрации.
Реагент в условиях испытания не обладает антимикробным действием. Испытания реагента на микробиологическую чистоту проводятся двухслойным агаровым методом.
Токсичность — показатель, характеризующий неблагоприятное воздействие используемого реагента на животных, определяют в перевиваемой линии клеток легкого эмбриона человека Л-68 или на белых мышах. При определении токсичности на белых мышах — тест-доза на одно животное — 0,2 мг.
Содержание белков штамма-продуцента E.coli определяют методом иммуноферментного анализа
Содержание примесей ДНК штамма-продуцента и примесей нуклеиновых кислот определяют методом ПЦР в реальном времени. Чувствительность метода не менее 3 пг. Примеси небелкового происхождения выявляются с помощью окрашивания геля серебром.
Посторонние примеси, его гомогенность и молекулярную массу определяют по результатам электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ), проведенного в редуцирующих условиях. В редуцирующих условиях, выявляемое красителем Coomassie Brilliant Blue, содержание соматотропина (ММ 22+0,6 КД) должно составлять не менее 98 %; суммарное количество примесей — димера, тримера и других фрагментов соматотропина не более 2 %.
Объем реагента проверяют путем измерения объема в градуированной емкости.
Допускается применение других аттестованных методов контроля с метрологическими характеристиками не ниже характеристик методов, указанных в данном разделе.
Физико- и биохимические показатели
- Внешний вид: прозрачный бесцветный раствор без запаха. Допускается легкая опалесценция и осадок
- Подлинность: Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора должно совпадать с временем удерживания основного пика на хроматограмме стандартного образца.
- PH 7.0+/-1
- Содержание белка не менее 3 мг/мл
- Посторонние примеси не более 2%
- Микробиологические показатели безопасности и токсичность: реагент должен быть стерильным, не должен быть токсичным
- Содержание белков штамма-продуцента E.coli не более 200 нг/мг
- Содержание примесей ДНК штамма- продуцента, не более 300 пг на 1 мг рекомбинатного белка
Безопасность и окружающая среда
Реагент является стерильным веществом, пожаро-взрывобезопасным, и не оказывающим вредного влияния на человека и окружающую среду.
Реагент относится к IV классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76
Микробиологические работы и работы по приготовлению реагента проводят в специально приспособленных изолированных помещениях (стерильных боксах) с обеспечением правил асептики в соответствии с технологическими документами и санитарно-эпидемиологическими требованиями.
Транспортировка и хранение
Транспортирование соматотропина осуществляется всеми видами крытого транспорта в транспортной таре, обеспечивающей условия сохранности продукции, в соответствии с правилами, действующими на данном виде транспорта. Хранение реагента следует производить при температуре 2-8°С.
Изготовитель гарантирует соответствие соматотропина требованиям настоящих технических условий при соблюдении условий транспортирования и хранения, установленных настоящими техническими условиями. Срок годности — 2 года со дня изготовления.
